Como reiniciar uma coluna C18

Passo 1

Desconecte a coluna C18 da corrente de fluxo e substitua a coluna na direção inversa. Executar o solvente de volta através da coluna na direção oposta irá afrouxar o efeito de empacotamento que ocorre com o tempo. É preciso ter cuidado para não perder uma grande quantidade de material de embalagem no final da coluna. Alguns fabricantes usam uma malha maior na extremidade a montante da coluna, de modo que, quando a direção do fluxo é invertida, a malha maior fica na posição a jusante. Este método de regeneração é chamado de backwashing. Para proteger contra o material de embalagem que flui para o detector do sistema e possivelmente causar um plug, ele permite que o sistema opere sem o detector conectado e direciona o fluxo de saída da coluna para o lixo.

Passo 2

Coloque o tubo de entrada de solvente em uma série de solventes para eluir os compostos retidos com a coluna na direção inversa. As séries de solventes utilizados variam em suas características hidrofílicas. Ao variar os solventes, eluirá compostos de natureza hidrofílica igualmente variada. Use 50 ml de cada um dos seguintes solventes, por sua vez: água (se você estiver usando um tampão em seu solvente), metanol, isopropanol, diclorometano, hexano, diclorometano e isopropanol.

Passo 3

Reconecte a coluna na orientação correta e execute o solvente pelo sistema. Use pelo menos 75 ml de solvente para lavar a coluna antes de prosseguir. Execute um teste de injeção de um padrão que você executou quando a coluna era nova e verifique os resultados. Preste atenção especial às horas de retenção máxima, filas de pico e o tempo total de análise. O grau em que esses atributos coincidem com a execução inicial da coluna quando ela era nova indicará o grau em que a coluna foi regenerada. Se os resultados não forem satisfatórios, substitua a coluna por uma nova e jogue a coluna antiga na lixeira.